Explorador y conquistador, nació en Briviesca en 1510.

El 24 de agosto de 1535 partió de Sanlúcar en la expedición de Pedro de Mendoza para el Río de la Plata.  Ayolas presenció la fundación de Nuestra Señora de Buenos Aires, la futura Buenos Aires. Enviado por Mendoza a explorar el río Paraná, fundó el fuerte Corpus Christi, mas tarde y siguiendo el río Paraguay, se dirigió a la sierra de la Plata, donde fundó en 1537 el fuerte de Candelaria, donde dejó como lugarteniente a Domingo Martínez de Irala.

Buscando una vía de comunicación con el Perú, reanudó la expedición hasta llegar a las cercanías de la región del Chaco, donde consiguió metales preciosos, tras lo cual regresó al fuerte de Candelaria, en este regreso y tras un enfrentamiento con los indígenas en 1537, Ayolas encontró la muerte.